오늘본 상품

자료 | 정보

응용자료

자료|정보

응용자료 | Protein Purification-Affinity Chromatography

페이지 정보

작성자 최고관리자 작성일17-06-30 09:55 조회11,748회 댓글0건

본문

Protein Purification-Affinity Chromatography


Protein purification은 생명공학의 가장 기본적인 실험으로 protein purification의 방법은 매우 다양하다. 높은 순도의 단백질을 얻기 위해서는 몇 개의 정제 단계를 거쳐야 한다. 가능한 한 많은 단백질을 얻기 위해 최소 정제​ 단계를 사용하는 가장 효율적인 정제 방법을 결정해야 한다. 적절한 정제 방법은 정제하고자 하는 단백질의 특성에 따라 선택해야 한다.

 특징

정제 방법 

 Ligand specificity

 Affinity chromatography

 Charge

 Ion exchange chromatography

 Size

 Gel filteration

[Affinity Chromatography]

​Affinity chromatography는 단백질 정제와 분리를 위해 단백질과 ligand 사이의 reaction을 이용하는 정제 방법이다. 이 정제 방법은 타겟 단백질에 대한 높은 정제 효율을 갖는다.

Affinity chromatography는 각 단백질의 생물학적 기능과 화학적 구조를 기본으로 하는 정제 방법이다. 이 방법은 기능면에서 다른 특성을 지닌 단백질로부터 활성 단백질을 분리 할 수 있게 해 주며, 다양한 종류의 단백질이 섞인 많은 양의 샘플에서도 고순도 단백질을 얻을 수 있다.

★ Tag의 종류

​Tag의 종류는 크기와 특성에 따라 나위며, 대표적인 tag는 6X His tag, GST (Glutathione S-transferase) tag, MBP (maltose-binding protein)과 FLAG 등이 있다.

① FLAG Tag와 6X His Tag

FLAG와 6X His tag​은 크기가 매우 작기 때문에, 재조합 단백질의 특성이나, 활성, 구조에 영향을 최소로 준다는 장점을 갖고 있다.

FLAG Tag은 8개의 아미노산으로 구성되어 있으나, 면역원성이 좋기 때문에 항원으로 사용하는 경우에는 ​tag를 제거 해야 한다.

6X His Tag는 낮은 면역원성의 특성을 갖고 있어 단백질의 구조나 기능에 많은 영향을 주지 않아 tag를 제거하지 않고 사용할 수 있다.

​②​ GST Tag와 MBP Tag

GST (glutathione S​-transferase)와 MBP (maltose-binding protein)는 매우 큰 사이즈의 tag이다.

GST는 26 kDa이고 pGEX vector를 이용하여 e.coli에서 발현하여 사용한다.​ GST fusion 단백질은 glutathione이 고정 된 affinity column을 사용하여 재조합 단백질을 쉽게 정제 할 수 있다. 정제 후 타겟 단백질과 GST 단백질을 분리하여 사용할 수 있다.

​MBP는 "pMAL Protein Fusion and Purification System"을 사용하여 정제를 하게 되는데, amylase column을 사용하여 재조합 단백질을 쉽게 정제 할 수 있다. MBP 재조합 단백질은 MBP의 높은 solubility 특성으로 정제가 더욱 용이하며, MBP와 단백질의 분리가 쉬운 장점을 갖고 있다.