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응용자료 | Protein Purification-DEAE & CM sepharose column
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작성자 최고관리자 작성일17-06-30 11:58 조회9,027회 댓글0건관련링크
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[DEAE Sepharose column purification]
★ DEAE Sepharose buffer 조성
Buffer | Condition |
Buffer A | 20 mM Tris, pH 8.0 1 mM EDTA |
Buffer B | 20 mM Tris, pH 8.0 1 mM EDTA 100 mM NaCl |
Buffer C | 20 mM Tris, pH 8.0 1 mM EDTA 200 mM NaCl |
Buffer D | 20 mM Tris, pH 8.0 1 mM EDTA 300 mM NaCl |
Buffer E | 20 mM Tris, pH 8.0 1 mM EDTA 500 mM NaCl |
Buffer F | 20 mM Tris, pH 8.0 1 mM EDTA 1 M NaCl |
★ DEAE Sepharose Column Purification Method
① Column preparation: DEAE sepharose fast flow를 준비한다.
② Equilibration: column의 3-5배 vol.의 binding buffer (Buffer A)를 column에 흘려준다.
Sample binding: 준비 한 sample을 column에 흘려주고, column을 빠져나온 sample은 새로운 tube에 모은다. (Flowthrough)
③ Buffer A-F를 준비하여 각 buffer 별로 2번 column에 흘려준다. column을 빠져나온 buffer를 각각 새로운 tube에 모은다. (Elution 1-12)
④ Elution 한 샘플을 SDS-PAGE로 확인한다.
[CM Sepharose column purification]
★ CM Sepharose buffer 조성
Buffer | Condition |
Buffer A | 20 mM NaH2PO4, pH 6.0 1 mM EDTA |
Buffer B | 20 mM NaH2PO4, pH 6.0 1 mM EDTA 100 mM NaCl |
Buffer C | 20 mM NaH2PO4, pH 6.0 1 mM EDTA 200 mM NaCl |
Buffer D | 20 mM NaH2PO4, pH 6.0 1 mM EDTA 300 mM NaCl |
Buffer E | 20 mM NaH2PO4, pH 6.0 1 mM EDTA 500 mM NaCl |
Buffer F | 20 mM NaH2PO4, pH 6.0 1 mM EDTA 1 M NaCl |
★ CM Sepharose Column Purification Method
① Column preparation: CM sepharose fast flow를 준비한다.
② Equilibration: column의 3-5 배 vol.의 bindign buffer (Buffer A)를 column에 흘려준다.
Sample binding: column에 준비 한 샘플을 흘려주고, column을 빠져나온 sample은 새로운 tube에 모은다. (Flowthrough)
③ Buffer A-F를 준비하여 각 buffer 별로 2번 column에 흘려준다. Column을 빠져나온 buffer를 각각 새로운 tube에 모은다. (Elution 1-12)
④ Elution 한 샘플을 SDS-PAGE로 확인한다.
