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응용자료 | Protein Purification-DEAE & CM sepharose column

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작성자 최고관리자 작성일17-06-30 11:58 조회9,027회 댓글0건

본문

​​Protein Purification-DEAE & CM sepharose column

 

[DEAE Sepharose column purification]

​★ DEAE Sepharose buffer 조성

Buffer 

Condition 

 Buffer A

 20 mM Tris, pH 8.0

1 mM EDTA​

 Buffer B

 20 mM Tris, pH 8.0

1 mM EDTA

100 mM NaCl​

 Buffer C

 20 mM Tris, pH 8.0

1 mM EDTA

200 mM NaCl​

 Buffer D

 20 mM Tris, pH 8.0

1 mM EDTA

300 mM NaCl​

 Buffer E

 20 mM Tris, pH 8.0

1 mM EDTA

500 mM NaCl​

 Buffer F

 20 mM Tris, pH 8.0

1 mM EDTA

1 M NaCl​

 

​★ DEAE Sepharose Column Purification Method

① Column preparation: DEAE sepharose fast flow를 준비한다.

②  Equilibration: column의 3-5배 vol.의 binding buffer (Buffer A)를 column에 흘려준다.

      Sample binding: 준비 한 sample을 column에 흘려주고, column을 빠져나온 sample은 새로운 tube에 모은다. (Flowthrough)​

③ Buffer A-F를 준비하여 각 buffer 별로 2번 column에 흘려준다. column을 빠져나온 buffer를 각각 새로운 tube에 모은다. (Elution 1-12)

④ Elution 한 샘플을 SDS-PAGE로 확인한다.

​[CM Sepharose column purification]

★ CM Sepharose buffer 조성

 Buffer

Condition 

 Buffer A

20 mM NaH2PO4, pH 6.0

1 mM EDTA 

 Buffer B

 20 mM NaH2PO4, pH 6.0

1 mM EDTA

100 mM NaCl​

 Buffer C

 20 mM NaH2PO4, pH 6.0

1 mM EDTA

200 mM NaCl​

 Buffer D

 20 mM NaH2PO4, pH 6.0

1 mM EDTA

300 mM NaCl​

 Buffer E

 20 mM NaH2PO4, pH 6.0

1 mM EDTA

500 mM NaCl​

 Buffer F

20 mM NaH2PO4, pH 6.0

1 mM EDTA

1 M NaCl 

 

★ CM Sepharose Column Purification Method

① Column preparation: CM sepharose fast flow를 준비한다.

② Equilibration: column의 3-5 배 vol.의 bindign buffer (Buffer A)를 column에 흘려준다.

    Sample binding: column에 준비 한 샘플을 흘려주고, column을 빠져나온 sample은 새로운 tube에 모은다. (Flowthrough)

③ Buffer A-F를 준비하여 각 buffer 별로 2번 column에 흘려준다. Column을 빠져나온 buffer를 각각 새로운 tube에 모은다. (Elution 1-12)

④ Elution 한 샘플을 SDS-PAGE로 확인한다.