Antibody 는 protein A와 protein G agarose에 대해 다른 binding affinity를 갖는다. 결국, antibody 종류에 따라 적절한 affinity agarose를 선택해야 한다.

★ Protein A & G selection

[Antibody Purification (By protein A/G Agarose)]

​① Protein A (또는 Protein G) resin을 흔들어 균질화 시킨 후 resion 5 ml을 column에 넣고 resin vol. 5배의 D.W를 넣어 column을 wahsing 한다. Resin의 양은 정제 할 항체 양에 비례한다.

②  Resin을 binding buffer로 washing 한다.

③ Rabbit igG serum을 filtering 한다.

④ Resin의 2-3배 vol.의 binding buffer로 washing 한다.

⑤ Column에 filtered rabbit serum을 넣는다.

⑦ Column을 막고 ratator를 사용하여 상온에서 1시간 동안 회전시킨다.

⑧ Column에 binding wash를 흘려준다. Washing 후 elution buffer를 넣고 흘러나오 sample을 새로운 tube에 모은다. Elution은 총 8회 진행하고 각각의 elution fraction은 새로운 tube에 모은다.

⑨ SDS-PAGE를 통해 각 fraction을 확인한다.

⑩ Elution fraction을 농축 시키고, PBS로 dialysis 시킨다.