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응용자료 | Antibody Purification-Protein A/G purification

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작성자 최고관리자 작성일17-06-30 15:14 조회11,645회 댓글0건

본문

Antibody Purification-Protein A/G purification


Antibody 는 protein A와 protein G agarose에 대해 다른 binding affinity를 갖는다. 결국, antibody 종류에 따라 적절한 affinity agarose를 선택해야 한다.

 

★ Protein A & G selection

 Species

Subclass 

Protein A 

Protein G 

 

 Species

Subclass 

Protein A 

Protein G 

Human 

IgG

 +++

+++ 

 

 Rat

IgG1 

 -

 IgG2

 +++

+++ 

 

 IgG2a

 -

 +++

 IgG3

 -

+++ 

 

 IgG2b

 -

++

 IgG4

 +++

+++ 

 

 IgG3

 -

++

 IgA

 +

 

 Rabbit

 IgG

 +++

+++ 

 IgD

+/-

 

 Goat

 IgG

 -

 IgE

 +/-

 -

 

 Bovine

 IgG

 +

+

 IgM

 +

 

 Hamster

 IgG

 +

 ++

 Mouse

 IgG1

 +

+++ 

 

 Horse

 IgG

 ++

+++ 

 IgG2a

+++ 

 +++

 

 Pig

 IgG

 ++

 ++

 IgG2b

 ++

++ 

 

 Sheep

 IgG

 -

 +

 IgG3

++ 

 

 Chicken

 IgY

 -

 -

 

[Antibody Purification (By protein A/G Agarose)]

​① Protein A (또는 Protein G) resin을 흔들어 균질화 시킨 후 resion 5 ml을 column에 넣고 resin vol. 5배의 D.W를 넣어 column을 wahsing 한다. Resin의 양은 정제 할 항체 양에 비례한다.

②  Resin을 binding buffer로 washing 한다.

③ Rabbit igG serum을 filtering 한다.

④ Resin의 2-3배 vol.의 binding buffer로 washing 한다.

⑤ Column에 filtered rabbit serum을 넣는다.

⑦ Column을 막고 ratator를 사용하여 상온에서 1시간 동안 회전시킨다.

⑧ Column에 binding wash를 흘려준다. Washing 후 elution buffer를 넣고 흘러나오 sample을 새로운 tube에 모은다. Elution은 총 8회 진행하고 각각의 elution fraction은 새로운 tube에 모은다.

⑨ SDS-PAGE를 통해 각 fraction을 확인한다.

⑩ Elution fraction을 농축 시키고, PBS로 dialysis 시킨다.

Binding Buffer 

 20 mM Sodium Phosphate (pH 7.0)

 Elution Buffer

 0.1 M Citric acid (pH 2.5 -3.0)

 Neutralization

 1 M Tris (pH 9.0)