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응용자료 | Antibody Purification-Antigen specific purification

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작성자 최고관리자 작성일17-06-30 15:24 조회11,238회 댓글0건

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​​​Antibody Purification-Antigen specific purification


[Affigel Method]

​① 항원과의 binding을 위해 affigel을 준비한다. 일반적으로 Affigel-10은 pI 7-11의 항원과의 coupling에 사용하며, Affigel-15는 pI 6.5 미만의 항원과의 coupling에 사용한다.

② 1 ml affigel bead를 column에 packing 후 10 ml D.W로 washing 후 coupling buffer (HEPES)로 washing 한다.

③ 1L buffer (HEPES  또는 PBS)에 5 mg antigen (1 mg/ml)을 넣고 4℃, O/N 으로 dialysis 시킨다.

④ Bead와 항원을 혼합 후 4℃, 4시간 동안 부드럽게 흔들며 반응시킨다.

⑤ Coupling 후 column에서 흘러나온 fraction (flowthrough)은 새로운 tube에 모아 놓고, blocking buffer 로1시간 동안 blocking 시킨다.

⑥ D.W로 washing 후 coupling buffer로 washing 한다.

⑦ Column에 serum을 넣고 부드럽게 교반한다.

⑧ Flowthrough fraction을 새로운 tube에 모은다.

⑨ Elution buffer를 column에 너어 elution fraction을 모은다.